Surveillance of antimicrobial resistant bacteria in flies (Diptera) in Rio de Janeiro city.

Antimicrobial-resistant bacteria were isolated from muscoid dipterans collected at five different areas of Rio de Janeiro city, in proximity to hospitals. Extracts obtained by maceration of flies were diluted and used as inocula for different culture media, with or without antibiotic (ceftriaxone 1 mg/L) supplementation. Purified isolates were submitted to antimicrobial susceptibility testing (AST). Bacterial identification was performed by MALDI TOF Microflex LT (Bruker Daltonics). A total of 197 bacterial strains were obtained from 117 dipterous muscoids. Forty-two flies (35.9%) carried bacteria resistant to at least one antimicrobial, while 7 insects (5.9%) carried multidrug-resistant bacteria (MDR), which were all members of the family Enterobacteriaceae. Among 10 MDR bacteria (5%), 5 strains (2,5%) were positive by PCR for one or more of the following antibiotic resistance genes: aac(6')-Ib, blaTEM-1, blaCTX-M-15, blaKPC-2 and blaNDM-1. Analysis of variance (ANOVA) and cluster analysis compared the number of resistant isolates per collection point and showed that a single location was statistically different from the others with regard to resistance. Although there are still no criteria to determine the environmental contamination by resistant bacteria the fact that they have been isolated from flies is an indication of a disseminated contamination. As such, these insects may be useful in monitoring programs of antibiotic resistance in non-hospital environments, where they could function as sentinels.

Separation of Escherichia coli from natural samples for identification of sources and microcosm inoculation.

Obtaining uncultured Escherichia coli from natural waters is an important step in the study of microbes in the environment, which are critical for bacterial decay and microbial source tracking. The quality of the samples used can influence the assays, because high contaminant concentrations, differing cell ages, and physiologic states can impair results. The proposed separation is based on a three-step filtration method applied to replicates of seven samples from a sewage plant affluent, collected in different periods. Aliquots of the leachate were inoculated into microcosms, aiming to observe the cultivability of the cells. The assay resulted in colimetry values ranging between 104 and 105 cells. In the leachate, averages of 1.05% of total coliforms and 1.10% of Escherichia coli were recovered from original samples. Although enduring unfavorable temperatures, salinities, and nutritional conditions, the inoculated microcosm populations grew approximately 310 times after 24 h. The final leachate contained cultivable cells in appropriate physiological states and quantities for inoculum in microcosm sets. The bacteria obtained from the leachate were also appropriate for surveys of microbial source tracking, because, in the developed procedure, organisms were separated from contaminants, while cell concentrations were sufficient for inocula.

Detection of Carbapenemase Genes in Aquatic Environments in Rio de Janeiro, Brazil.

This study reveals the presence of different carbapenemase genes (blaKPC, blaNDM, blaGES, and blaOXA48-like genes) detected directly from water samples and clonal dispersion (by pulsed-field gel electrophoresis [PFGE] and multilocus sequence typing [MLST]) of KPC-2-producing Enterobacteriaceae in two important urban aquatic matrixes from Rio de Janeiro, Brazil, highlighting the role of aquatic environments as gene pools and the possibility of community spreading.

Desenvolvimento de meios seletivos para contagem de leveduras em membrana filtrante para monitorar a poluição no Lago Juturnaíba, Rio de Janeiro / Selective culture media for MF yeast counts to monitor pollution in Lake Juturnaiba, Rio de Janeiro

Os múltiplos e intensos usos da água têm causado crescente poluição e impactos nos ecossistemas aquáticos. Considerando que os coliformes termotolerantes refletem a poluição fecal, e os parâmetros químicos a qualidade imediata da água, seria desejável usá-los juntamente a indicadores complementares. O uso da contagem de leveduras como bioindicador da qualidade da água tem sido proposto. A estrutura de suas comunidades muda de acordo com os fatores ambientais, incluindo os impactos antrópicos oriundos dos efluentes domésticos e das atividades agrícolas. No entanto, as contagens de leveduras pelos métodos de cultivo são dificultadas pela competição com os bolores, além do que, as técnicas que reduzem os bolores, também afetam as leveduras. Buscamos desenvolver um método para contagem de leveduras em amostras de água, através dos meios BIL(Base de isolamento de leveduras) seletivos, e avaliar preliminarmente o potencial das leveduras isoladas como bioindicadoras da qualidade da água. Coletamos 46 amostras de 08 pontos no Lago de Juturnaíba/RJ. Foram aferidos os parâmetros temperatura, pH, OD, Saturação de OD, SDT, condutividade e DBO5. Analisamos leveduras utilizando o método de membrana filtrante, incubada sobre suporte, com novas variações seletivas da Base de Isolamento de Leveduras (BIL) em caldo, suplementada com diferentes fontes de Carbono e inibidores. Procedemos as contagens de UFC/100mL e isolamos os diferentes morfotipos observados. Procedemos a identificação polifásica das culturas. Foram feitas as análises do NMP de Escherichia coli, Coliformes Totais e Enterococcus sp. e foram realizadas análises qualitativas das bactérias potencialmente patogênicas. Buscamos relacionar as médias geométricas dos resultados microbiológicos e as médias aritméticas dos dados físico-químicos através da correlação linear de Pearson e de Regressão Múltipla. Obtivemos contagens significativas de leveduras de até mais que 10.000 / 100mL nos pontos-controle de águas limpas e águas poluídas na região. Foram usados como inibidores Cicloeximida, etanol ou corante verde-bromo-cresol e como fonte de carbono glicose ou galactose. Não houve interferências significativas de bolores quando usamos esses meios seletivos. Duzentos e trinta e cinco culturas de leveduras foram isoladas e identificadas por taxonomia convencional e vinte e cinco culturas representativas tiveram suas identificações confirmadas pelo seqüenciamento da região D1/D2 da subunidade maior do rDNA. Muitas leveduras encontradas são de prováveis novas espécies ou novos biotipos de espécies conhecidas. As leveduras prevalentes no lago foram Candida guilliermondii ou linhagem similar de Candida famata que foram seletivamente favorecidas pelo meio BIL-galactose cicloeximida. O meio BIL-etanol favoreceu Candida krusei e outras espécies anamorfas de Pichia, que foram mais frequentes nos pontos de maior poluição doméstica. Os meios BIL glicose-cicloeximida e BIL verde-bromocresol favoreceram o isolamento de maior diversidade de espécies. A alta frequência de ascomycetes isolados neste estudo foi consistente com sua associação a águas de ambientes poluídos por matéria orgânica. Um aumento na frequência de basidiomycetes observado depois das chuvas, pode ter sido relacionado à influência do run-off. O isolamento das espécies relacionadas a diferentes tipos de poluição sugere o uso destes meios no estudo de leveduras como indicador de eutroficação por fontes diversas, tais como as atividades agrícolas e o lançamento de efluentes domésticos.